布鲁氏菌OMP16抗体分析

    布 鲁 氏 菌 外 膜 蛋 白 （ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏ－ ｔｅｉｎ，ＯＭＰ）１６是一种与肽聚糖相关的保守性脂蛋 白，广泛存在于布鲁氏菌的６个种属。本试验表 达、纯化出布鲁氏菌 ＯＭＰ１６，并以纯化的布鲁氏菌 ＯＭＰ１６作为包被抗原，建立检测布鲁氏菌抗体的间 接 ＥＬＩＳＡ 法，为布鲁氏菌病检测及疫苗评价等提供 一种灵敏度高的技术方法。移液器，德国 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司；电子天平，美国 Ｄ－Ｉ－Ｃ 公司；台式高速低温离心机，德 国 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司；ＰＣＲ仪，北京赛百奥科技有限公 司；核酸电泳仪，美国 Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司；凝胶成像仪， 上海天能科技有限公司；电热恒温培养箱，上海跃进医疗器械厂；超声波细胞粉碎仪，宁波新艺超声设备 有限公司；酶联免疫检测仪，北京 Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司。

    目前最常用的异源蛋白表达系统是原核表达系 统，因其原核表达载体带有筛选和纯化标签，方便了 蛋白的纯化。但原核表达载体系统也存在不足之 处，会出现异源表达的蛋白与大肠埃希氏菌系统不 相容，蛋白无法表达，以及表达的重组蛋白不可溶的现象。 先 后 尝 试 了 多 种 不 同 的 载 体，如 ｐＧＥＸ－４Ｔ－１载体，ｐＥＴ－２８ａ（＋）载体，但均出现了重 组蛋白 未 表 达 的 现 象。最 终 选 用 ｐＥＴ－３２ａ载 体， ｐＥＴ系统是目前 Ｅ．ｃｏｌｉ 表达重组蛋白最强大的系 统。ＥＬＩＳＡ 方法受多种因素的影响，首先是抗原抗 体的反应条件。根据抗原抗体反应具有特异性、比 例性、可逆性、阶段性等特点，采用方阵滴定法筛选 抗原抗体最佳的反应条件。